玉龙雪山乌鸡遗传资源调查与种质特性评价
Investigation of Genetic Resource and Evaluation of Germplasm Characteristics of Yulong Snow Mountain Black-Boned Chicken
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滇姜花(Hedychium yunnanense)为姜科(Zingiberaceae)姜花属(Hedychium)植物,主要分布于中国的云南省、四川省、广西壮族自治区[1],植物化学研究显示该植物主要包含二萜[2-5]、倍半萜[6-7]等成分,其中部分二萜化学成分显示细胞毒活性和抑制巨噬细胞中NO产生的活性,如本课题组在前期研究中发现滇姜花中二萜化合物hedychenoids B、hedychenone、villosin对肿瘤细胞SGC-7901的生长有抑制作用,化合物hedychenoids B、villosin对巨噬细胞中NO的产生有抑制作用[5]。近年来,作者揭示了多种姜科植物的化学成分及其活性[8-11],为了继续进行该方面的研究,本研究对滇姜花根部的次生代谢产物进行了分离和鉴定,其研究结果将对滇姜花的合理开发和利用提供一定的数据支持。
1. 材料与方法
1.1 仪器与材料
试验样品于2013年采于云南省西双版纳州勐腊县,由中国科学院西双版纳热带植物园谭运红副研究员鉴定为滇姜花(H. yunnanense)。
质谱用API Qstar Pulsar型质谱仪测定;核磁共振谱用Bruker AM-400核磁共振仪测定,TMS为内标;HPLC为Agilent 1260液相色谱仪;薄层层析板和色谱硅胶由青岛海洋化工厂生产;MCI为日本三菱公司生产;TLC检测通过10%硫酸-乙醇溶液加热观察点样斑点。
1.2 提取与分离
干燥的滇姜花根5.0 kg,粉碎后用乙醇热提3次,减压蒸馏,得浸膏323 g;将浸膏分散于蒸馏水中,分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收溶剂,得乙酸乙酯部分170 g;用石油醚-丙酮(9∶1-1∶1)对乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离,梯度洗脱,得到6个部分(F1-F6);对F3 (8 g)进行硅胶柱色谱[氯仿-丙酮(20∶1)]分离,得到4个部分F3.1-3.4,其中F3. 4再经硅胶柱色谱[石油醚-乙酸乙酯(8∶2)、氯仿-乙酸乙酯(9∶1)]分离,得到化合物1 (2 mg)、2 (2 mg)、3 (3 mg);对F4 (13 g) 进行硅胶柱色谱[氯仿-乙酸乙酯(10∶1)]分离,得到5个部分F4.1-4.5,其中F4.2经硅胶柱色谱[石油醚-乙酸乙酯(1∶1)、石油醚-丙酮(3∶1)]分离,再经MCI纯化,得到化合物4 (3 mg)、5 (3 mg)、6 (4 mg)。化合物1~6结构如图1所示。
2. 结果与分析
化合物1:黄色粉末状固体。ESI-MS m/z: 329 [M+1]+。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 12.66 (1H, s, 5-OH), 8.07 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-2′, 6′), 7.02 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.44 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 6.35 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-6), 3.90 (3H, s, 3-OCH3), 3.87 (3H, s, 7-OCH3), 3.86 (3H, s, 4′-OCH3); 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 178.8 (s, C-4), 165.4 (s, C-7), 162.0 (s, C-5), 161.6 (s, C-4′), 156.7 (s, C-9), 155.9 (s, C-2), 138.8 (s, C-3), 130.1 (d, C-2′, C-6′), 122.8 (s, C-1′), 114.0 (d, C-3′, C-5′), 106.0 (s, C-10), 97.8 (d, C-6), 92.1 (d, C-8), 60.1 (q, 3- OCH3), 55.8 (q, 7- OCH3), 55.4 (q, 4′- OCH3)。以上数据与文献[12]报道的基本一致,故鉴定化合物1为5-羟基-3,7,4′-三甲氧基黄酮(5-hydroxy-3,7,4′-trimethoxyflavone)。
化合物2:黄色粉末状固体。ESI-MS m/z: 343 [M+1]+。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.94 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.88 (2H, d, J = 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.34 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 6.18 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 3.98 (3H, s, -OCH3), 3.82 (3H, s, -OCH3), 3.77 (6H, s, -OCH3); 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 173.6 (s, C-4), 163.4 (s, C-7), 160.7 (s, C-5), 160.4 (s, C-4′), 158.5 (s, C-9), 152.2 (s, C-2), 140.6 (s, C-3), 129.3 (d, C-2′, C-6′), 122.7 (s, C-1′), 113.5 (d, C-3′, C-5′), 109.0 (s, C-10), 95.3 (d, C-6), 92.0 (d, C-8), 59.4 (q, -OCH3), 56.0 (q, -OCH3), 55.4 (q, -OCH3), 55.0(q, -OCH3)。以上数据与文献[12]报道的基本一致,故鉴定化合物2为3,5,7,4′-四甲氧基黄酮(3,5,7,4′-tetramethoxyflavone)。
化合物3:黄色粉末状固体。ESI-MS m/z: 343 [M+1]+。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.82 (2H, d, J = 9.2 Hz, H-2′, 6′), 7.01 (2H, d, J = 9.2 Hz, H-3′, 5′), 6.81 (1H, s, H-5), 6.60 (1H, s, H-3), 3.98 (3H, s, 8-OCH3), 3.97 (3H, s, 6-OCH3), 3.93 (3H, s, 7-OCH3), 3.89 (3H, s, 4′-OCH3); 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 177.1 (s, C-4), 162.0 (s, C-4′), 161.2 (s, C-2), 157.5 (s, C-6), 154.6 (s, C-9), 152.5 (s, C-8), 140.4 (s, C-7), 127.8 (d, C-2′, 6′), 123.8 (s, C-1′), 114.5 (d, C-3′, 5′); 112.7 (s, C-10), 107.0 (d, C-3), 96.3 (s, C-5), 62.1 (q, 8-OCH3), 61.5 (q, 7-OCH3), 56.2 (q, 6-OCH3), 55.4 (4′-OCH3)。以上数据与文献[13]报道的基本一致,故鉴定化合物3为6, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮(6,7,8,4′-tetramethoxyflavone)。
化合物4:无色晶体。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.95 (3H, s, -OCH3), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.37-7.40 (2H, m), 9.82 (1H, s, -CHO); 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 191.0 (d, -CHO), 151.7 (s, C-4), 147.1 (s, C-3), 129.8 (s, C-1), 127.6 (d, C-6), 114.4 (d, C-5), 108.7 (d, C-2), 56.1 (q, 3-OCH3); EIMS m/z: 152 (M+, 60), 151 (72), 81 (100)。以上数据与文献[14]报道的基本一致,故鉴定化合物4为4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde)。
化合物5:白色晶体。ESI-MS m/z: 155 [M+1]+。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.70 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-5), 6.46 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-2), 6.34 (dd, 1H, J = 8.8, 2.4 Hz, H-6), 3.79 (3H, s, -OCH3), 3.76 (3H, s, -OCH3);13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 150.3 (s, C-1), 149.8 (s, C-3), 142.9 (s, C-4), 112.5 (d, C-5), 105.9 (d, C-6), 100.6 (d, C-1), 56.6 (q, -OCH3), 55.7 (q, -OCH3)。以上数据与文献[15]报道的基本一致,故鉴定化合物5为3,4-二甲氧基苯酚(3,4-dimethoxyphenol)。
化合物6:无色晶体。ESI-MS m/z: 209 [M+1]+。1H NMR (Acetone-d6) δ 8.27 (1H, s, OH), 7.69 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7), 7.42 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 7.24 (1H, dd, J = 1.8 和 8.2 Hz, H-6), 6.97 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 6.49 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8), 4.01 (3H, s, 9-OCH3), 3.82 (3H, s, -OCH3); 13C NMR (Acetone-d6) δ 167.1 (C-9), 149.3 (C-3), 147.9 (C-4), 144.9 (C-7), 126.6 (C-1), 123.1 (C-6), 115.3 (C-8), 114.7 (C-5), 110.5 (C-2), 55.5 (-OCH3), 50.7 (9-OCH3)。以上数据与文献[16]报道的基本一致,故鉴定化合物6为methyl ferulate。
3. 讨论
本研究从滇姜花根部中分得6个酚性化合物,经波谱分析和文献报道数据对照,鉴定所分离的6个化合物的结构分别为5-羟基-3,7,4′-三甲氧基黄酮(1)、3,5,7,4′-四甲氧基黄酮(2)、6,7,8,4′-四甲氧基黄酮(3)、4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(4)、3,4-二甲氧基苯酚(5)、methyl ferulate (6)。其中化合物1~3为黄酮类化合物,以上化合物均为首次从该植物中分离得到。赵庆等[3, 13]发现滇姜花中多个二萜具有细胞毒活性,并且对滇姜花粗提物、滇姜花素A、姜花酮进行了动物体内抗肿瘤活性测试,结果表明它们均能显著性抑制小鼠体内移植性肿瘤H22的生长,其中滇姜花素A对小鼠H22肿瘤生长抑制率达54.27%,作用最强;李玉鹏等[5]发现滇姜花中部分二萜对NO产生有抑制作用。但是还没有文献报道该植物中酚性成分的分离和药理作用,本课题组将以上述物质为基础,进一步开展相关活性研究,为其合理开发提供依据。
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表 1 玉龙雪山乌鸡遗传资源调查地点、观测项目及数量
Table 1 Genetic resources survey sites, observation items and sample size of Yulong Snow Mountain black-boned chicken
测定项目
tested item性别
gender调查地点及取样数量 survey site and sample number 合计
total太安乡
Taian Township九河乡
Jiuhe Township龙蟠乡
Longpan Township拉市乡
Lashi Township羽色
feather color公 male 21 10 647 7 6 012 母 female 143 15 5 159 10 肤色、胫色、舌苔和喙色等
skin color, shank color, tongue coating and
beak color, etc.公 male 10 0 50 0 120 母 female 10 0 50 0 体重和体尺
body weight and size公 male 3 2 23 2 78 母 female 6 4 35 3 屠宰测定和营养成分分析
slaughter test, and nutrient composition analysis公 male 0 0 30 0 60 母 female 0 0 30 0 蛋品质
egg quality— 0 0 60 0 60 表 2 玉龙雪山乌鸡羽色类型
Table 2 Feather color types of Yulong Snow Mountain black-boned chicken
羽色
feather color数量 number 占比/% proportion 公 male 母 female 合计 total 公 male 母 female 合计 total 净色羽
single color feathers白 white 3 4 7 0.05 0.07 0.12 黑 black 61 5315 5376 1.00 88.41 89.41 非净色羽
multicolor feathers黑褐 dark brown 598 0 598 9.95 0.00 9.95 黑黄 black yellow 0 31 31 0.00 0.52 0.52 总计 total 662 5350 6012 11.00 89.00 100.00 表 3 玉龙雪山乌鸡肤色、胫色、喙色和舌苔颜色
Table 3 Color of skin, shank, beak and tongue coating of Yulong Snow Mountain black-boned chicken
项目
item乌度
black degree数量 number 占比/% proportion 公 male 母 female 合计 total 公 male 母 female 合计 total 肤色
skin colour深乌 deep black 57 59 116 95.00 98.33 96.67 浅乌 light black 3 1 4 5.00 1.67 3.33 胫色
shank colour深乌 deep black 58 52 110 96.67 86.67 91.67 浅乌 light black 2 8 10 3.33 13.33 8.33 喙色
beak colour深乌 deep black 53 58 111 88.33 96.67 92.50 浅乌 light black 7 2 9 11.67 3.33 7.50 舌苔
tongue coating深乌 deep black 56 57 113 93.33 95.00 94.17 浅乌 light black 4 3 7 6.67 5.00 5.83 表 4 成年玉龙雪山乌鸡的体重和体尺
Table 4 Body weight and body size of adult Yulong Snow Mountain black-boned chicken
性别
gender体重/g
body weight体斜长/cm
body slope length胫长/cm
shank length胫围/cm
shank circumference胸深/cm
chest depth公 male 2073±260.18 25.20±1.52 14.21±0.94 4.72±0.48 11.29±1.05 母 female 1 902±285.22 21.45±1.61 11.21±0.83 3.65±0.64 10.63±0.82 性别
gender胸宽/cm
chest width胸围/cm
chest girth胸角/°
chest angle骨盆宽/cm
pelvis width龙骨长/cm
fossil bone length公 male 8.40±0.55 29.14±2.17 63.87±4.81 8.97±0.55 13.43±0.97 母 female 8.16±0.67 29.41±2.11 72.31±7.92 8.53±0.61 11.53±0.94 表 5 玉龙雪山乌鸡与云南其他地方鸡种的体型指数
Table 5 Body size indexes among Yulong Snow Mountain black-boned chicken (YSMB) and other local chicken breeds in Yunnan
品种
breeds性别
gender体型结构指数
BSI强壮指数
SI第一胸指数
FTI第二胸指数
STI高脚指数
HTI髋胸指数
PCIYSMB 公 male 0.1459 8.23 74.40 62.55 56.39 93.65 母 female 0.1697 8.87 76.76 70.77 52.26 95.66 YJ 公 male 0.2449 12.53 63.41 60.52 51.17 85.89 母 female 0.2383 10.96 65.03 67.29 45.97 73.16 NX 公 male 0.1403 7.66 57.13 64.06 54.61 75.60 母 female 0.1314 6.56 53.94 60.99 49.95 70.16 TLB 公 male 0.2099 9.39 82.54 75.91 44.71 106.12 母 female 0.2184 8.47 88.03 85.12 38.79 122.62 HPB 公 male 0.1723 9.92 66.14 65.12 57.56 93.33 母 female 0.1806 9.59 66.10 69.64 53.11 96.30 DL 公 male 0.1785 7.71 52.18 51.42 43.17 242.36 母 female 0.1739 7.65 48.62 53.63 43.98 188.62 WLS 公 male 0.2107 10.23 68.39 64.92 48.53 86.82 母 female 0.2040 8.56 70.93 63.73 41.95 89.09 注:YJ. 盐津乌骨鸡;NX. 尼西鸡;TLB. 他留乌骨鸡;HPB. 华坪乌骨鸡;DL. 独龙鸡;WLS. 无量山乌骨鸡。
Note: YJ. Yanjin black-boned chicken; NX. Nixi chicken; TLB. Taliu black-boned chicken; HPB. Huaping black-boned chicken; DL. Dulong chicken; WLS. Wuliangshan black-boned chicken; BSI. body structure index; SI. sthenia index; FTI. the 1st thoracic index; STI. the 2nd thoracic index; HTI. high tibial index; PCI. pelvis and chest index.表 6 放养条件下玉龙雪山乌鸡不同周龄的体重
Table 6 Body weight of Yulong Snow Mountain black-boned chicken at different weeks of age under stocking conditions
g 性别
gender0周龄
zero week old2周龄
two weeks old4周龄
four weeks old8周龄
eight weeks old公 male 35.37±1.84 123.67±13.29 286.67±83.48 661.33±208.85 母 female 32.40±2.17 118.67±14.08 273.33±107.59 521.00±162.94 性别
gender12周龄
12 weeks old16周龄
16 weeks old24周龄
24 weeks old43周龄
43 weeks old公 male 1 041.67±237.43 1 256.00±245.47 1 769.33±262.40 2 065.00±260.18 母 female 916.67±212.50 1 099.00±216.17 1 548.33±223.41 1 901.67±234.34 表 7 舍饲平养条件下玉龙雪山乌鸡的日增重
Table 7 Weight gain of Yulong Snow Mountain black-boned chicken under flat rearing
性别
gender始重/g
initial weight末重/g
final weight增重/g
weight gain单羽平均日增重/g
average daily gain of per individual羽均日采食量/g
average feed intake料重比
ratio of consumed feed and weight gain公 male 860±7.98 1 623.1±5.91 763.01±6.43 11.06±0.09 31.52 2.78 母 female 710±11.8 1 377.8±15.81 667.8±21.11 9.68±0.31 28.19 2.91 表 8 玉龙雪山乌鸡的屠宰性能
Table 8 Slaughtering performance of Yulong Snow Mountain black-boned chicken
性别
gender宰前活重/g
slaughter weight屠体重/g
dressed weight屠宰率/%
dressed percentage半净膛率/%
percentage of half-eviscerated yield公 male 1 906.76±250.14 1 697.96±217.32 89.09±1.37 82.18±2.17 母 female 1 691.00±312.34 1 510.40±303.54 89.20±4.40 79.00±4.09 性别
gender全净膛率/%
percentage of eviscerated yield腿肌率/%
percentage of leg muscle胸肌率/%
percentage of breast muscle瘦肉率/%
percentage of lean meat公 male 68.44±2.43 26.61±2.14 13.14±1.98 39.75±2.48 母 female 65.81±3.50 21.62±3.07 14.89±1.78 36.51±3.71 表 9 玉龙雪山乌鸡的肉质和肌肉营养成分
Table 9 Meat quality and muscle nutritional composition of Yulong Snow Mountain black-boned chicken
性别
genderpH值
pH value滴水损失
drip loss熟肉率/%
cooking percentage水分/%
water content干物质含量/%
content of dry matter公 male 6.11±0.25 3.78±1.59 61.75±2.53 72.34±1.64 27.66±1.64 母 female 6.19±0.09 3.26±0.82 62.80±2.77 71.58±1.04 28.42±1.04 性别
gender粗蛋白含量/%
content of crude protein粗脂肪含量/%
content of crude fat粗灰分含量/%
content of crude ash公 male 23.95±1.45 0.44±0.07 1.20±0.15 母 female 24.02±0.94 1.31±0.49 1.27±0.16 -
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