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德昂族酸茶防治非酒精性脂肪肝作用的研究

卢薇, 邵宛芳, 卢凤美, 谢桂华, 钟凯, 熊江波, 吴吉, 侯艳

卢薇, 邵宛芳, 卢凤美, 等. 德昂族酸茶防治非酒精性脂肪肝作用的研究[J]. 云南农业大学学报(自然科学), 2020, 35(1): 114-121. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201909029
引用本文: 卢薇, 邵宛芳, 卢凤美, 等. 德昂族酸茶防治非酒精性脂肪肝作用的研究[J]. 云南农业大学学报(自然科学), 2020, 35(1): 114-121. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201909029
Wei LU, Wanfang SHAO, Fengmei LU, et al. The Preventive Effect of Suancha from De’ang Nationality on Non-alcoholic Fatty Liver[J]. JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(Natural Science), 2020, 35(1): 114-121. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201909029
Citation: Wei LU, Wanfang SHAO, Fengmei LU, et al. The Preventive Effect of Suancha from De’ang Nationality on Non-alcoholic Fatty Liver[J]. JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(Natural Science), 2020, 35(1): 114-121. DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201909029

德昂族酸茶防治非酒精性脂肪肝作用的研究

基金项目: 国家现代农业茶叶产业体系专项资金(CARS-23);云南德凤茶业有限公司合作项目(KX141721)
详细信息
    作者简介:

    卢薇(1992—),女,云南文山人,硕士,主要从事茶叶功效研究。E-mail: luviluvi@136.com

    通信作者:

    侯艳(1978—),女,云南玉溪人,硕士,讲师,主要从事茶叶功效研究。E-mail: zgynndhy@163.com

  • 中图分类号: R 965.2

摘要:
目的 酸茶为德昂族独特的茶叶制品。探究酸茶对防治外源性膳食诱导引起的非酒精性脂肪肝的预防作用。
方法 通过动物试验,以保肝药为对照,分别灌胃不同剂量的酸茶水浸提物,为期4周。对血脂指标、肝功能指标、抗氧化指标以及胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)和细胞色素P4502E1 (CYP2E1)的表达量进行检测,对试验大鼠肝脏组织进行病理性观察及评价。
结果 酸茶能够有效降低非酒精性脂肪肝试验大鼠血清中CHOL和TG的含量,同时增加HDL-C的水平;可降低大鼠血清中AST和ALT活性;升高大鼠血清和肝脏组织GSH-Px和SOD的活性。高剂量酸茶能够改善由于脂质堆积引起的肝组织病变问题。酸茶可提高试验大鼠肝脏组织中IGF-1 mRNA的表达,抑制CYP2E1 mRNA的表达。
结论 德昂族酸茶具有预防大鼠非酒精性脂肪肝的作用。

 

The Preventive Effect of Suancha from De’ang Nationality on Non-alcoholic Fatty Liver

Abstract:
Purpose Suancha was the unique tea product from De’ang Nationality. Our aim was to study the effect of Suancha on the non-alcoholic fatty liver caused by exogenous dietary induction.
Method Contrast with hepatoprotectants, the rats were given different does for 4 weeks, and then executed. The peripheral blood, blood lipid index, liver function index and antioxidant index were detected; the expression insulin growth factor (IGF-1) and cytochrome P4502E1 (CYP2E1) were studied; pathological observation and evaluation on liver tissue of rats were carried out.
Result Suancha could effectively reduce the content of CHOL and TG in the serum of rats with non-alcoholic fatty liver, and increase the level of HDL-C; it could reduce the activity of AST and ALT in rat serum; it could increase enzyme activity level of GSH-Px and SOD in rat’s serum and liver; high-dose Suancha could improve liver tissue damage caused by lipid accumulation; Suancha could increase the expression of IGF-1 mRNA in liver tissue of test rats and inhibit the expression of CYP2E1 mRNA.
Conclusion Suancha from De’ang Nationality has a positive effect on non-alcoholic fatty liver on rats.

 

  • 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种发病率较高的全球性疾病,在西方人群中的发病率高达20%~30%,在中国也已经位于慢性肝病发病率的第二位,仅次于病毒性肝炎[1]。研究发现:高脂血症是引起非酒精性脂肪肝的重要因素之一,目前在临床上使用的降脂药多是促进血液中的脂质运输到肝脏,推进肝脏对身体中过多的脂质进行代谢排泄;长期服用化学合成的降脂药会导致肝脏功能下降和脂质代谢困难,从而易导致肝脏的负担加重乃至发生病变,以及脂肪的沉积加剧[2]。因此,研发不会对肝脏造成过多负担的肝病治疗药已迫在眉睫。

    近年来,随着不断深入的研究,已经证实了云南普洱茶具有降血脂、减肥、降血糖、抗氧化及防止动脉粥样硬化等多种保健功效[3-8];尤其是降血脂、降血糖效应和抗氧化功效,对于非酒精性脂肪肝的防治显示出了应用前景。据推测,濮人是云南最早种植以及制作茶叶的民族,而濮人后裔被确定为如今的布朗族和德昂族[9]。作为云南特有的少数民族之一,德昂族在云南特殊的地理环境中形成了丰富多彩的民族茶文化。德昂族对茶叶的认知起源于茶叶的医疗作用,在长期适应气候变化以及各种自然环境的过程中,茶叶对德昂族生存的维系与疾病的治愈曾起到至关重要的作用。酸茶是德昂族的一种传统茶叶,也被称为湿茶或腌茶[10-11],是一种微生物发酵茶产品。

    本试验以德昂族酸茶为样本,研究酸茶对非酒精性脂肪肝的防治作用和对非酒精性脂肪肝肝脏组织损伤的保护作用,为开发新型防治肝脏疾病保健食品,以及为德昂族饮用酸茶进行日常保健提供科学依据,也为酸茶产品的开发与深加工开拓新领域。

    受试茶样为酸茶,由云南德凤茶叶有限公司提供。感官审评参照GB/T 23776—2009《茶叶感官审评方法》进行;其化学成分参照GB/T 8304—2008《茶 水分测定》、GB/T 8305—2008《茶 水浸出物测定》、GB/T 8313—2008《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》、GB/T 8312—2008《茶 咖啡碱测定》、蒽酮比色法[12]和GB/T 8314—2013《茶 游离氨基酸总量的测定》进行。

    SPF级Wistar雄性大鼠(180~220 g),由北京维通利华试验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2012-0001。

    KXL,市售某保肝药品。

    基础饲料和高脂饲料由昆明医科大学动物试验中心提供配制。高脂饲料配方来源于《保健食品检验与评价技术规范》,配方为78.8%基础饲料,10%蛋黄粉,10%猪油,1%胆固醇,0.2%胆盐。

    酸茶磨碎过筛(20目),沸水浸提趁热过滤,茶汤减压低温(60±1) ℃分别浓缩至0.5、1.0和1.5 g/mL,装瓶灭菌(120 ℃,20 min),低温(4~8 ℃)冷藏。

    选择SPF级Wistar雄性大鼠80只,在为期1周的适应期间对大鼠各方面的状况进行观察后,若出现厌食及体重明显下降等情况,则将其及时剔除,之后随机取10只作为阴性对照组继续饲喂基础饲料,其余试验大鼠进入高脂模型建立阶段饲喂高脂饲料。4周后,眼底静脉丛血检测血脂指标。若血脂指标显著高于阴性对照组大鼠,则说明高脂模型建立成功,可以进行下一步试验阶段,反之则继续饲喂高脂饲料直至建模成功。建模成功后,根据试验大鼠的饮食、体重及血脂指标等数据剔除不合格大鼠。其余大鼠先随机抽取10只作为阳性对照组,另以每组10只分为4个组,分别灌胃不同剂量的酸茶茶汤和KXL药物,其中酸茶低、中、高剂量组分别为人体推荐摄入量的10、20和30倍组,即1.0、2.0 和3.0 g/kg (bw),而KXL药物组的剂量为0.15 g/kg (bw)。灌胃周期4周,在此期间每日观察大鼠皮毛状况及活动情况,并且每周进行称重和记录大鼠的摄食量。末次灌胃后,禁食不禁水12 h,摘眼球采血并离心处理得血清−20 ℃冷藏备用。之后牺牲大鼠,迅速取出肝脏,称重后观察肝脏的色泽和质地,并制备10%肝脏组织匀浆−20 ℃冷藏备用。同时从最大叶距边缘5 mm处取部分肝脏组织固定于10%福尔马林溶液中备用。且每组随机挑选3只试验大鼠的肝脏,取部分组织置于−80 ℃的条件下贮存待测。

    取待测血清分别测定其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性,以及丙二醛(MDA)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白总胆固醇(HDL-C)含量;取待测10%肝脏组织匀浆分别测定其SOD、GSH-Px的活性以及MDA的含量。测定方法均参照试剂盒说明书进行操作,MDA、SOD和GSH-Px试剂盒购自南京建成生物工程研究所;AST、ALT、CHOL、TG和HDL-C检测试剂购自BECKMAN COULTER试验系统(苏州)有限公司。

    取固定于10%福尔马林溶液中的备用肝脏组织进行脱水、石蜡包埋、切片和HE染色(苏木精-伊红染色法),最后进行显微镜常规病理分析。

    取出待测肝脏组织提取其RNA,定量后逆转录合成cDNA,最后荧光定量PCR。方法均参照试剂盒说明书进行操作,TaKaRa Code:DRR047A、TaKaRa Code:DRR820A试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司。

    PCR引物序列如下所示。

    R-CYP2E1:CAAGGCTGTCAAGGAGGTGCTACTG;GCTTAGGGAAAACCTCCGCACATCC。

    R-IGF-1:AGCGCCACACTGACATGCCC;GGATCTTGCGGTGACGTGGC。

    Gapdh内参引物:GGGCTCTCTGCTCCTCCCTGT;AACCAGGCGTCCGATACGGC。

    采用SPSS 22.0统计软件进行方差分析。

    感官审评结果显示:本试验所用的酸茶外形呈方块状、表面光滑、呈褐绿色。内质汤色黄亮,由于独特的发酵方式使得香气及滋味拥有特殊的酸味,且舒适醇正。由于酸茶在晒干之前已经被舂碎,因此无完整叶片状的叶底。

    表1可知:酸茶中的游离氨基酸含量高,使得酸茶的滋味更加鲜爽;水浸出物含量高,由此可证实其口感丰富;茶多酚含量低,因此苦涩感较弱。

    表  1  受试茶样成分含量(mean±SD)
    Table  1.  Test tea sample composition analysis table %
    水分water 水浸出物water extract 茶多酚tea polyphenol 咖啡碱theine 茶多糖tea polysaccharide 游离氨基酸free amino acid
    9.55±0.07 39.50±2.82 25.90±0.71 2.94±0.01 2.40±0.13 3.99±0.01
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    表2可知:由于前期高脂模型的建立,大鼠初始体重除了阴性对照组以外,其余各组间差异不显著(P>0.05)。在试验第7、14、21和28天,酸茶高剂量组大鼠的体重显著低于阳性对照组(P<0.05),且与阴性对照组相比差异不显著(P>0.05)。灌胃期间,酸茶中、高剂量组体重的增长显著低于阳性对照组(P<0.05)。

    表  2  酸茶对Wistar大鼠体重的影响(mean±SD)
    Table  2.  Effect of Suancha on the body weight of Wistar rats g
    组别
    groups
    试验时间/d experiment time 增长值
    increase value
    0 7 14 21 28
    阴性对照组
    negative control group
    426.99±23.25 b 435.55±26.42 c 444.39±26.14 c 454.99±27.37 c 463.06±30.21 c 36.07±9.30 a
    阳性对照组
    positive control group
    481.52±27.96 a 492.34±23.82 a 503.60±24.99 a 515.34±26.99 a 522.06±28.52 a 40.53±17.76 a
    药物组drug group 479.55±45.13 a 490.85±43.63 ab 502.23±47.81 a 511.05±50.88 ab 516.09±51.66 ab 36.54±17.57 a
    酸茶低剂量组
    Suancha low dose group
    478.88±40.20 a 484.15±40.87 ab 497.37±40.71 ab 507.70±41.37 ab 513.87±46.41 ab 34.99±22.96 a
    酸茶中剂量组
    Suancha middle dose group
    479.15±36.92 a 472.51±41.71 ab 478.58±45.32 abc 488.02±48.73 abc 488.51±44.81 abc 9.35±16.73 b
    酸茶高剂量组
    Suancha high dose group
    478.90±36.38 a 455.89±35.01 bc 465.50±34.29 bc 474.72±34.24 bc 481.53±31.94 bc 2.63±26.81 b
    注:同列相同字母表示差异不显著(P>0.05),不同字母表示差异显著(P<0.05);下同。
    Note: The same letter in same column indicates that the difference is not significant (P>0.05), the different letter indicates significant difference (P<0.05); the same as below.
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    表3可知:饲喂基础饲料的阴性对照组与饲喂高脂饲料的处理组相比,4周总摄食量及每日平均摄食量差异不显著(P>0.05)。酸茶低、中、高剂量组与阴性对照组的4周总摄食量及每日平均摄食量相比差异也不显著(P>0.05),说明酸茶的摄入对于高脂血症大鼠的日常饮食量没有影响。

    表  3  酸茶对Wistar大鼠摄食总量和平均摄食量的影响(mean±SD)
    Table  3.  Effect of Suancha on total and average food intake of Wistar rats g
    组别groups 4周摄食总量total feed in 4 weeks 每日摄食平均量average daily feed
    阴性对照组negative control group 759.92±55.50 a 27.14±1.98 a
    阳性对照组positive control group 692.93±109.90 a 24.75±3.92 a
    药物组drug group 708.19±43.34 a 25.29±1.55 a
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 696.64±69.41 a 24.88±2.48 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 745.64±70.90 a 26.63±2.53 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 706.02±92.39 a 25.21±3.30 a
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    表4可知:与阴性对照组相比,阳性对照组血清CHOL、TG和HDL-C均具有显著差异(P<0.05)。与阳性对照组相比,酸茶低、中、高剂量组和药物组的CHOL含量均显著低于阳性对照组(P<0.05),显著高于阴性对照组(P<0.05)。酸茶中、高剂量组和药物组的TG含量显著低于阳性对照组(P<0.05);酸茶低、中、高剂量组的HDL-C含量显著高于阳性对照组(P<0.05)。这提示酸茶具有改善脂肪肝病变大鼠血脂异常的作用。

    表  4  酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清CHOL、TG和HDL-C含量的影响
    Table  4.  Effect of Suancha on serum CHOL, TG and HDL-C of Wistar rats with non-alcoholic fatty liver mmol/L
    组别groups CHOL TG HDL-C
    阴性对照组negative control group 1.66±0.13 c 0.70±0.07 b 1.28±0.19 a
    阳性对照组positive control group 3.16±0.31 a 1.10±0.08 a 0.86±0.15 b
    药物组drug group 2.36±0.40 b 0.78±0.21 b 0.76±0.13 b
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 2.52±0.34 b 0.93±0.12 ab 1.08±0.18 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 2.43±0.68 b 0.73±0.31 b 1.20±0.33 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 2.56±0.40 b 0.79±0.14 b 1.11±0.12 a
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    表5可知:阳性对照组大鼠血清AST活性显著高于其余各组(P<0.05),且其余各组之间差异不显著(P>0.05);阴性对照组及酸茶中、高剂量组大鼠血清ALT活性显著低于阳性对照组(P<0.05)。这提示酸茶具有调节非酒精性脂肪肝大鼠肝功能指标的作用。

    表  5  酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清AST和ALT活性的影响
    Table  5.  The active influence of Suancha on serum ALT and AST of rats with non-alcoholic fatty liver U/L
    组别groups AST ALT
    阴性对照组negative control group 83.56±9.79 b 40.33±5.05 b
    阳性对照组positive control group 137.14±30.31 a 81.86±43.68 a
    药物组drug group 97.20±39.15 b 62.40±29.83 ab
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 100.00±12.07 b 55.63±28.85 ab
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 110.75±17.9 3 b 51.38±15.91 b
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 83.56±9.79 b 40.33±5.05 b
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    表6可知:与阳性对照组相比,阴性对照组、药物组和酸茶高剂量组血清GSH-Px活性高,且具有差异显著性(P<0.05)。与阳性对照组相比,阴性对照组、药物组和酸茶中、高剂量组血清SOD活性高,且具有差异显著性(P<0.05);酸茶低剂量组高于阳性对照组,但无显著差异(P>0.05)。阳性对照组血清MDA含量高于其余各组,酸茶高剂量组含量最低,但各组间无显著差异(P>0.05)。这提示酸茶具有增强非酒精性脂肪肝大鼠血清抗氧化酶活性的作用。

    表  6  酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝脏组织GSH-Px和SOD活性、MDA含量的影响
    Table  6.  The active influence of Suancha on serum and liver tissue GSH-Px, SOD and MDA of rats with non-alcoholic fatty liver
    组别
    groups
    血清 serum 肝脏组织 liver tissue
    GSH-Px/
    (U·mL−1)
    SOD/
    (U·mL−1)
    MDA/
    (nmol·mL−1)
    GSH-Px/
    (U·mg−1)
    SOD/
    (U·mg−1)
    MDA/
    (nmol·mg−1)
    阴性对照组negative control group 366.32±41.07 ab 23.19±0.54 a 13.82±2.60 a 115.44±13.29 a 44.95±5.24 a 6.23±0.86 a
    阳性对照组positive control group 335.31±9.54 c 22.11±1.44 b 16.96±7.80 a 85.79±8.25 b 39.44±4.34 a 6.94±1.76 a
    药物组drug group 376.75±15.43 a 22.85±0.35 a 16.46±5.13 a 109.64±25.77 b 40.31±2.44 a 6.84±2.00 a
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 343.87±8.54 bc 22.16±0.60 b 15.11±5.72 a 110.35±9.01 ab 44.20±6.51 a 6.82±1.99 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 344.22±4.49 bc 22.85±0.36 a 15.00±2.63 a 112.18±21.59 ab 44.11±7.36 a 6.60±2.40 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 367.68±8.28 ab 22.83±0.47 a 12.89±5.28 a 113.22±17.05 ab 45.16±6.09 a 6.41±1.91 a
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    表6还可知:阴性对照组肝组织GSH-Px活性显著高于阳性对照组(P<0.05);药物组和酸茶低、中、高剂量组肝组织GSH-Px活性高于阳性对照组,但差异不显著(P>0.05)。各组之间肝组织SOD活性均高于阳性对照组,但差异不显著(P>0.05),其中酸茶高剂量组最高。各组之间肝组织MDA含量均低于阳性对照组,但各组间差异不显著(P>0.05)。

    牺牲所有试验组大鼠后,解剖并采取其肝脏组织进行对比。通过肉眼对本试验大鼠肝脏的观察表明:阴性对照组大鼠肝脏颜色暗红、边缘锐利、质韧;阳性对照组大鼠肝脏颜色呈土黄色,体积明显增大,边缘钝化,脆弱易碎,切面略带油腻感;药物组及酸茶各剂量组肝脏外观较阳性对照组相比有所改善,其中药物组及酸茶低、中剂量组肝脏外观比较相似,酸茶高剂量组肝脏外观最为接近于阴性对照组。

    图1可知:阴性对照组肝小叶结构正常,肝索排列规则,未见肝细胞变性。阳性对照组肝细胞弥漫的脂肪变性、气球样变,部分肝小叶结构破坏,可见片状及多灶性坏死,大量炎细胞浸润,血管壁增厚,少许纤维组织增生,此组病变最重;药物组肝小叶结构存在,肝细胞不同程度(轻-中重度)的脂肪变性、气球样变,弥漫的水样变性,可见不同程度(轻-中重度)的小叶内炎症,多数病例为轻度,部分血管壁增厚,个别病例肝小叶结构破坏,可见片状坏死;酸茶低剂量组肝小叶结构存在,肝细胞中重度脂肪变性、气球样变,可见不同程度(轻-中重度)的小叶内炎症,坏死灶多见,可见片状坏死,部分血管壁增厚,少许纤维组织增生,此组病例病变轻于阳性对照组,但重于其他组;酸茶中剂量组肝小叶结构存在,肝细胞中重度脂肪变性,中度气球样变,可见不同程度(轻-中重度)的小叶内炎症,坏死灶多见,部分血管壁增厚,少许纤维组织增生,此组病例病变轻于阳性对照组及酸茶低剂量组,但重于其他组;酸茶高剂量组肝小叶结构存在,肝细胞不同程度(轻-中重度)的脂肪变性,轻-中度气球样变,可见不同程度(轻-中重度)的小叶内炎症,多数病例为轻-中度,部分血管壁增厚,个别病例肝小叶结构破坏,可见片状坏死,此组病例病变与药物组接近,轻于其他病变组。

    图  1  各剂量组试验大鼠光镜下肝脏组织形态学变化(HE 10×20)
    Figure  1.  Morphological changes of liver tissue in rats HE 10×20 in each dose group

    图2可知:与阴性对照组相比,阳性对照组和酸茶低剂量组大鼠肝脏组织中的IGF-1基因表达量显著下降(P<0.05),但药物组、酸茶中、高剂量组的变化差异不显著(P>0.05);与阳性对照组相比,阴性对照组、药物组及酸茶高剂量组肝脏组织IGF-1基因表达量显著上升(P<0.05),且三者的IGF-1基因表达量处于同一水平(P>0.05),这提示酸茶可上调非酒精性脂肪肝大鼠肝组织IGF-1基因的表达量,与保肝药物的作用一致,并达到健康对照鼠水平。

    图  2  酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织IGF-1CYP2E1 mRNA表达量的影响
    注:A表示与阴性对照组差异显著,P<0.05;B表示与阳性对照组差异显著,P<0.05;C表示与药物组差异显著,P<0.05。
    Figure  2.  The influence of Suancha on the gene expression of IGF-1 and CYP2E1 in rats with non-alcoholic fatty liver
    Note: A means significant difference between the negative baseline, P<0.05; B means significant difference between the positive baseline, P<0.05; C means significant difference between the drug group, P<0.05.

    图2还可知:与阴性对照组相比,阳性对照组大鼠肝脏组织CYP2E1 mRNA表达量显著上升(P<0.05);酸茶低、中、高剂量组的表达量均下降,其中酸茶中、高剂量组差异显著(P<0.05)。除了药物组外,其余各组试验大鼠肝脏组织CYP2E1 mRNA表达量均显著低于阳性对照组(P<0.05)。这提示酸茶可下调非酒精性脂肪肝大鼠肝组织CYP2E1 mRNA基因的表达量。

    膳食中大量的脂肪摄取是导致高脂血症、引起动脉粥样硬化的主要因素[13]。本研究发现:酸茶在显著降低高脂血症试验大鼠CHOL和TG含量的同时,还可增加HDL-C含量,说明酸茶对高脂血症试验大鼠具有调节血脂的作用。

    在生物体内,AST和ALT都是反映肝损伤的常用酶活指标[14]。AST和ALT在肝脏组织中主要分布于肝细胞的线粒体,血清中不同的转氨酶升高能反映出肝脏不同程度的受损情况。本试验显示:阳性对照组中AST和ALT酶活显著升高,大鼠灌胃不同剂量的酸茶茶汤后,血清中的AST和ALT酶活较阳性对照组显著降低。推测高脂饮食可造成试验动物肝脏的明显损伤,而酸茶可有效抑制其AST和ALT酶活的升高。

    GSH-Px是人体的抗氧化酶之一,测定GSH-Px的酶活性是判断生物体抗过氧化能力的重要指标[15]。SOD是一种广泛存在于生物体内的金属酶,具有保护生物体、防止衰老以及治疗疾病等多种作用[16]。GSH-Px和SOD能清除机体内的氧自由基或酶类,以此维持机体中自由基的生产和降解之间处于动态平衡的状态。现代研究显示:氧化应激及脂质过氧化反应是多种引起脂肪肝形成和发展原因的共同机制[17-20],而长时间的氧化应激会导致GSH-Px和SOD活性的下降,而造成脂质过氧化的终产物MDA含量的增加。MDA是脂质过氧化的产物,会使细胞膜的流动性和通透性发生功能性障碍,最终导致肝细胞结构和功能受损[21]。本试验显示:与阴性对照组相比,阳性对照组非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝脏组织中GSH-Px和SOD的活力下降,MDA的含量升高,说明非酒精性脂肪肝的形成伴随着严重的脂质过氧化反应。经口灌胃不同剂量的酸茶和保肝药物4周后,与阳性对照组相比,试验大鼠血清及肝脏组织中的GSH-Px和SOD活性升高,而MDA含量降低。说明酸茶可能通过提高GSH-Px和SOD的活性增强清除自由基的能力,从而进一步提高机体的抗氧化能力,增强脂质代谢功能,减缓脂毒性。

    通过对肝脏组织的肉眼观察以及显微镜下肝脏病理切片的观察,阴性对照组为正常肝组织;阳性对照组可见弥漫的脂肪变性、气球样变,炎症坏死最重,可见片状及多灶性坏死,此组病变最重;酸茶高剂量组病变与药物组接近,可见不同程度(轻-中重度)的脂肪变性、气球样变,轻-中度小叶内炎症;酸茶低、中剂量组病变轻于阳性对照组,但重于酸茶高剂量组和药物组,均有肝细胞中重度脂肪变性、气球样变,并有不同程度的小叶内炎症。由此可知,酸茶对高脂饮食引起的非酒精性肝损伤具有很好的预防保护作用,其原因与酸茶中的多种生物活性成分如茶多酚、茶多糖等可能有着密切关系。

    胰岛素样生长因子-1 (insulin-like growth factor I,IGF-1)是IGF三种肽类激素中的一种,当肝脏严重受损时IGF-1的表达减少[22-23]IGF-1在肝脏组织对胰岛素抵抗有保护作用,能改善肝功能,减轻肝脏的氧化损伤[24-26]。有研究表明:低剂量IGF-1有对抗肝纤维化的作用[27]。本试验结果显示:与阴性对照组相比较,阳性对照组非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织中IGF-1基因表达显著下降。通过灌胃酸茶和保肝药物后,IGF-1表达比起阳性对照组显著升高。随着IGF-1基因表达量升高,各试验组试验大鼠血清中的TG含量呈现下降情况,可能是因为IGF-1能够加强代谢功能,同时改善肝功能,从而减轻肝脏的氧化损伤。

    细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)是细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)的乙醇诱导形式,它在非乙醇脱氢酶氧化途径中起重要作用,是酒精性肝病的主要发病机制[28]。试验结果显示:与阴性对照组相比较,阳性对照组非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织中CYP2E1表达显著上升。随着CYP2E1的高表达,试验大鼠体内的MDA含量呈现升高趋势,而GSH-Px和SOD活力降低。酸茶灌胃后,CYP2E1表达比阳性对照组显著降低,同时试验大鼠体内GSH-Px和SOD的活性升高,MDA含量也呈现降低趋势。

    综上所述,酸茶可通过上调非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织中IGF-1 mRNA的表达,抑制CYP2E1 mRNA的表达,降低试验大鼠血清CHOL和TG含量,增加HDL-C水平;同时升高大鼠血清GSH-Px和SOD的酶活性,降低其体内AST和ALT的活性,有效缓解肝细胞脂质堆积以及脂质过氧化反应的发生,保护肝脏细胞膜以及线粒体膜免遭由于脂质堆积引起的损伤和肝组织病变,具有预防非酒精性脂肪肝的作用。

  • 图  1   各剂量组试验大鼠光镜下肝脏组织形态学变化(HE 10×20)

    Figure  1.   Morphological changes of liver tissue in rats HE 10×20 in each dose group

    图  2   酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织IGF-1CYP2E1 mRNA表达量的影响

    注:A表示与阴性对照组差异显著,P<0.05;B表示与阳性对照组差异显著,P<0.05;C表示与药物组差异显著,P<0.05。

    Figure  2.   The influence of Suancha on the gene expression of IGF-1 and CYP2E1 in rats with non-alcoholic fatty liver

    Note: A means significant difference between the negative baseline, P<0.05; B means significant difference between the positive baseline, P<0.05; C means significant difference between the drug group, P<0.05.

    表  1   受试茶样成分含量(mean±SD)

    Table  1   Test tea sample composition analysis table %

    水分water 水浸出物water extract 茶多酚tea polyphenol 咖啡碱theine 茶多糖tea polysaccharide 游离氨基酸free amino acid
    9.55±0.07 39.50±2.82 25.90±0.71 2.94±0.01 2.40±0.13 3.99±0.01
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    表  2   酸茶对Wistar大鼠体重的影响(mean±SD)

    Table  2   Effect of Suancha on the body weight of Wistar rats g

    组别
    groups
    试验时间/d experiment time 增长值
    increase value
    0 7 14 21 28
    阴性对照组
    negative control group
    426.99±23.25 b 435.55±26.42 c 444.39±26.14 c 454.99±27.37 c 463.06±30.21 c 36.07±9.30 a
    阳性对照组
    positive control group
    481.52±27.96 a 492.34±23.82 a 503.60±24.99 a 515.34±26.99 a 522.06±28.52 a 40.53±17.76 a
    药物组drug group 479.55±45.13 a 490.85±43.63 ab 502.23±47.81 a 511.05±50.88 ab 516.09±51.66 ab 36.54±17.57 a
    酸茶低剂量组
    Suancha low dose group
    478.88±40.20 a 484.15±40.87 ab 497.37±40.71 ab 507.70±41.37 ab 513.87±46.41 ab 34.99±22.96 a
    酸茶中剂量组
    Suancha middle dose group
    479.15±36.92 a 472.51±41.71 ab 478.58±45.32 abc 488.02±48.73 abc 488.51±44.81 abc 9.35±16.73 b
    酸茶高剂量组
    Suancha high dose group
    478.90±36.38 a 455.89±35.01 bc 465.50±34.29 bc 474.72±34.24 bc 481.53±31.94 bc 2.63±26.81 b
    注:同列相同字母表示差异不显著(P>0.05),不同字母表示差异显著(P<0.05);下同。
    Note: The same letter in same column indicates that the difference is not significant (P>0.05), the different letter indicates significant difference (P<0.05); the same as below.
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    表  3   酸茶对Wistar大鼠摄食总量和平均摄食量的影响(mean±SD)

    Table  3   Effect of Suancha on total and average food intake of Wistar rats g

    组别groups 4周摄食总量total feed in 4 weeks 每日摄食平均量average daily feed
    阴性对照组negative control group 759.92±55.50 a 27.14±1.98 a
    阳性对照组positive control group 692.93±109.90 a 24.75±3.92 a
    药物组drug group 708.19±43.34 a 25.29±1.55 a
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 696.64±69.41 a 24.88±2.48 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 745.64±70.90 a 26.63±2.53 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 706.02±92.39 a 25.21±3.30 a
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    表  4   酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清CHOL、TG和HDL-C含量的影响

    Table  4   Effect of Suancha on serum CHOL, TG and HDL-C of Wistar rats with non-alcoholic fatty liver mmol/L

    组别groups CHOL TG HDL-C
    阴性对照组negative control group 1.66±0.13 c 0.70±0.07 b 1.28±0.19 a
    阳性对照组positive control group 3.16±0.31 a 1.10±0.08 a 0.86±0.15 b
    药物组drug group 2.36±0.40 b 0.78±0.21 b 0.76±0.13 b
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 2.52±0.34 b 0.93±0.12 ab 1.08±0.18 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 2.43±0.68 b 0.73±0.31 b 1.20±0.33 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 2.56±0.40 b 0.79±0.14 b 1.11±0.12 a
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    表  5   酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清AST和ALT活性的影响

    Table  5   The active influence of Suancha on serum ALT and AST of rats with non-alcoholic fatty liver U/L

    组别groups AST ALT
    阴性对照组negative control group 83.56±9.79 b 40.33±5.05 b
    阳性对照组positive control group 137.14±30.31 a 81.86±43.68 a
    药物组drug group 97.20±39.15 b 62.40±29.83 ab
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 100.00±12.07 b 55.63±28.85 ab
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 110.75±17.9 3 b 51.38±15.91 b
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 83.56±9.79 b 40.33±5.05 b
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    表  6   酸茶对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝脏组织GSH-Px和SOD活性、MDA含量的影响

    Table  6   The active influence of Suancha on serum and liver tissue GSH-Px, SOD and MDA of rats with non-alcoholic fatty liver

    组别
    groups
    血清 serum 肝脏组织 liver tissue
    GSH-Px/
    (U·mL−1)
    SOD/
    (U·mL−1)
    MDA/
    (nmol·mL−1)
    GSH-Px/
    (U·mg−1)
    SOD/
    (U·mg−1)
    MDA/
    (nmol·mg−1)
    阴性对照组negative control group 366.32±41.07 ab 23.19±0.54 a 13.82±2.60 a 115.44±13.29 a 44.95±5.24 a 6.23±0.86 a
    阳性对照组positive control group 335.31±9.54 c 22.11±1.44 b 16.96±7.80 a 85.79±8.25 b 39.44±4.34 a 6.94±1.76 a
    药物组drug group 376.75±15.43 a 22.85±0.35 a 16.46±5.13 a 109.64±25.77 b 40.31±2.44 a 6.84±2.00 a
    酸茶低剂量组Suancha low dose group 343.87±8.54 bc 22.16±0.60 b 15.11±5.72 a 110.35±9.01 ab 44.20±6.51 a 6.82±1.99 a
    酸茶中剂量组Suancha middle dose group 344.22±4.49 bc 22.85±0.36 a 15.00±2.63 a 112.18±21.59 ab 44.11±7.36 a 6.60±2.40 a
    酸茶高剂量组Suancha high dose group 367.68±8.28 ab 22.83±0.47 a 12.89±5.28 a 113.22±17.05 ab 45.16±6.09 a 6.41±1.91 a
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  • 通信作者:  侯艳 zgynndhy@163.com
  • 收稿日期:  2019-09-23
  • 修回日期:  2019-12-07
  • 网络首发日期:  2019-12-31

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