不同精粗比日粮对奶牛瘤胃真菌菌群结构变化的影响研究
Study on the Changes of Rumen Fungal Flora in Dairy Cows with Different Ratios of Concentrate-to-roughage Diet
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Keywords:
- ratio of concentrate-to-roughage /
- cow /
- rumen /
- fungi
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奶牛瘤胃中栖息着包括细菌、原虫和真菌在内的多种厌氧微生物，其中真菌在瘤胃中数量较少，但对日粮中粗饲料的降解具有重要作用[1-2]。对于反刍动物瘤胃微生物的研究主要集中在细菌和原虫方面，对于瘤胃真菌的研究则相对较少。ORPIN等[3]对瘤胃中原虫的研究发现：部分鞭毛原虫的细胞壁中含有几丁质成分，确定了瘤胃中真菌的存在，使瘤胃中真菌的研究引起极大的关注。近年来随着分子生物学技术的发展，可通过高通量测序技术研究真菌DNA的ITS区，根据ITS区的差异来研究真菌的多样性[4-5]。SIROHI等[6]利用真菌ITS1高变区研究饲喂高纤维饲粮的肉牛瘤胃真菌多样性，共分析出52个克隆，揭示31种不同ITS1种系，通过与数据库对比，共得出48%的根囊鞭菌属、29%的新美鞭菌属、9%的枝梗鞭菌属和8%的厌氧鞭菌属，揭示根囊鞭菌属在印度杂交卡兰弗里斯牛瘤胃中是一种优势真菌属。有关研究表明：与瘤胃中其他微生物相比，瘤胃厌氧真菌是纤维素酶、木质素酶和其他水解酶的生产者[2,7]，它附着在高度木质化组织上，利用其发达的假根渗入植物细胞壁，通过广泛的菌丝体的渗透和扩张，使植物细胞壁组织疏松，有利于瘤胃中其他微生物进入更多难以处理的木质纤维素饲料中，提高粗饲料的利用率[8]。有研究表明：反刍动物瘤胃真菌的数量变化主要受饲粮结构的影响，但对于具体真菌数量的变化研究则较少。本研究通过ITS高通量测序技术探索不同精粗比日粮下奶牛瘤胃真菌菌群的变化，旨在为实践养殖生产中日粮的合理配比提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 试验动物与试验设计
试验采用完全随机设计的方法，将24头体重相近、健康状态良好、胎次相同、产后约3周的中国荷斯坦奶牛分为2组，每组各12头，分别饲喂高精粗比日粮(精粗比为60∶40，HC组)和低精粗比日粮(精粗比为40∶60，LC组)，试验周期为45 d。根据NRC (2001)奶牛饲养标准配制日粮(表1)，采用全混合日粮饲喂方式，全天自由饮水。
表 1 不同精粗比下日粮组成及营养水平(干物质基础)Table 1. Composition and nutrition content of diet (DM) with different ratios of concentrate to roughage日粮组成
diet composition含量/% content LC HC 浓缩料concentrate 22.5 23.3 压片tablet 13.84 26.55 甜菜颗粒beet granules 2 4.5 啤酒糟beer slack 1.53 5 苜蓿青贮alfalfa silage 4.12 2 苜蓿alfalfa 10.32 3.02 新青贮new alfalfa 45.06 35 美加力Megalac 0.09 0.09 F100 0.18 0.18 小苏打NaHCO3 0.166 0.166 百霉清MycofixPlus 0.014 0.014 益康XP 0.135 0.135 奥优金Optigen 0.045 0.045 总计total 100 100 营养水平
nutrition level组成 composition LC HC 粗蛋白/% crude protein 17.42 17.50 产奶净能/(MJ·kg−1)
milk production net energy5.94 6.48 钙/% Ca 0.76 0.71 磷/% P 0.40 0.44 中性洗涤纤维/%
neutral detergent fiber35.65 31.20 注：LC. 低精粗比40∶60；HC. 高精粗比60∶40；下同。
Note: LC. low ratio of concentrate-to-roughage 40∶60; HC. high ratio of concentrate-to-roughage 60∶40; the same as below.1.2 试验样品采集与处理
从奶牛的口腔采集瘤胃液。首先用牛鼻夹把牛头固定，在口腔中放入硬管(木头、硬塑胶均可，内径要超过取样软管)，插入深度不超过咽部，外面露出约20 cm，工作人员用手把其固定，然后把软管(约2.5 m)通过口腔硬管内径逐步送入瘤胃，最后将牛头压低，通过牛的自然咀嚼使瘤胃液自然流出，装入保温桶迅速带回实验室。用4层纱布过滤并分装至5 mL离心管中，置于−80 ℃冻存备用。
1.3 试验样品的DNA提取
利用AxyPrep Bacterial Genomic DNA Miniprep Kit试剂盒(购于南京建成生物工程研究所有限公司)提取奶牛瘤胃总细菌DNA，按试剂盒说明进行操作。
1.4 PCR扩增引物
参考刘开辉等[9]的方法，对真菌ITS2区进行扩增，引物序列为：上游引物F：GCATCGATGAAGAACGCAGC；下游引物R：ATATGTAGGATGAAGAACGYAGYRAA。
1.5 上机测序
用带有barcode的特异引物扩增真菌DNA的ITS2区，将扩增的PCR产物切胶回收，用QuantiFluorTM荧光计进行定量，将纯化的扩增产物等量混合，连接测序接头，用PCR Free进行构建文库，最终在Illumia PE250上机测序。
1.6 序列分析
将样品经ITS测序得到的PE reads通过Overlap关系进行拼接得到tags序列，为了更好地获得样品物种的多样性信息，首先对序列进行质控和过滤，将质控和过滤后的优质序列参照UNITE (或者其他的ITS数据库)进行聚类(相似性为97%)得到OTU数，将聚类出的OTU进行稀释曲线的绘制，用以观察物种的测序深度是否满足后续试验的进行。
通过RDP比对注释软件进行物种注释，将注释的菌种进行α和β多样性分析，其中α多样性(组内差异菌种)通过Ace、Chao1、Shannon和Simpson 4个指数来表示。Ace和Chao1值代表菌群丰富度指数，其值越大，表明物种总数越多；Shannon指数代表菌群多样性指数，其值越大表明物种多样性越高，各物种分配越均匀；Simpson指数代表不同物种的概率，概率越接近于1，表明物种多样性越高。β多样性指数(组间差异菌种)通过PCoA进行分析。PCoA是通过考虑进化关系，将进化结构中聚类相近的物种结合在一起，反映样品间的差异，选取贡献率最大的第一和第二主成分进行作图展示，群落结构相似度高的样品倾向于聚集在一起，群落差异很大的样品则会距离较远。
1.7 数据处理
采用Excel 2003对组间的OTU数、α多样性指标、Raw Tags和Clean Tags数进行数据预处理，然后利用SAS 8.2中完全随机的方差分析，并采用最小显著法LSD进行差异显著性比较，以P<0.05作为差异显著性标准，P<0.01作为差异极显著的标准。
2. 结果与分析
2.1 瘤胃真菌OTU聚类
2.1.1 真菌OTU数量
由表2可知：HC组的平均OTU数极显著低于LC组(P<0.01)，说明随着饲粮中精料水平的增加，奶牛瘤胃真菌的生长受到抑制，导致奶牛瘤胃真菌总数降低。
表 2 各样品相似性97%时OTU数量Table 2. The number of OTUs when each sample with the 97% similarity项目item HC LC 阈值threshold 0.03 0.03 OTU数
OTU number488±60.51 A 764±173.20 B 注：同一项目同行肩标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；下同。
Note: Different capital letters in the same project shoulders indicate that the difference is extremely significant (P<0.01), different lowercase letters indicate significant difference (P<0.05); the same as below.2.1.2 OTU稀释曲线
由图1可知：测序深度较小时OTU数目变化剧烈，OTU数目随着测序深度的增加而大幅增加，当测序深度达到30 000 reads数时，2组稀释曲线仍有上升趋势，但趋于稳定，表明测序深度已基本覆盖样品中的所有真菌物种。
2.2 瘤胃真菌菌群多样性的变化
2.2.1 α多样性分析
由表3可知：LC组的Ace和Chao1指数均极显著高于HC组(P<0.01)，说明随着精料的添加，奶牛瘤胃中真菌总数显著降低；对于Shannon指数，LC组与HC组相比无显著差异(P>0.05)，而Simpson指数HC组较LC组显著增加，表明随着精料的增加，奶牛瘤胃真菌多样性显著降低(P<0.05)。
表 3 α 多样性指数Table 3. Diversity index of α指数index HC LC Ace 1 084.14±182.07 A 1 434.59±358.51 B Chao1 1 088.72±168.71 A 1 460.06±340.57 B Shannon 4.03±0.35 4.00±0.96 Simpson 0.86±0.04 a 0.75±0.14 b 2.2.2 β多样性分析
由图2可知：在第1主成分(贡献率为56.6%)时，HC组和LC组组间分布距离较远，各组内距离较接近，说明组内细菌多样性差异小，组间的细菌多样性差异较大。
2.3 奶牛瘤胃真菌菌群结构组成的变化
2.3.1 真菌门水平
门水平上，2组日粮饲喂下奶牛瘤胃中共有12门真菌，其中丰度较高的门包括子囊菌门、担子菌门、被孢霉亚门、新美鞭菌门和未分类真菌门(表4)。通过对比2组真菌门结构的差异可知：HC组瘤胃中子囊菌门和担子菌门丰度极显著高于LC组(P<0.01)，毛霉亚门和新美鞭菌门丰度在两组中差异不显著，HC组中未分类真菌丰度显著高于LC组(P<0.05)。
表 4 真菌门水平丰度Table 4. The abundance of fungi phylum门phylum 丰度/% abundance P值
P valueLC HC 子囊菌门Ascomycota 6.31 22.93 <0.01 担子菌门Basidiomycota 0.44 2.78 <0.01 被孢霉亚门Mortierellomycota 0.18 0.000 5 <0.01 毛霉亚门Mucoromycota 0.05 0.1 0.63 新美鞭菌门Neocallimastigomycota 20.97 21.85 0.77 未分类真菌门
unclassified fungi1.61 14.57 0.011 2.3.2 真菌属水平
属水平上，2组日粮饲喂下瘤胃中共含有207属菌，其中丰度较高的属有19种(表5)。HC组中伊萨酵母属、酵母菌属、克鲁维酵母菌属、瘤胃壶菌属、新美鞭菌属、菌生格孢菌、毕赤酵母菌属和Cutaneotrichosporon丰度较LC组极显著增加(P<0.01)，瘤胃真菌属丰度较LC组显著增加(P<0.05)，根囊鞭菌属、枝梗鞭菌属、厌氧鞭菌属和曲霉属丰度均较LC组极显著降低(P<0.01)，念珠菌属较LC组显著降低(P<0.05)，而对于枝孢菌属丰度来说2组差异不显著(P>0.05)。
表 5 真菌属水平丰度Table 5. The abundance of fungi genus属水平
genus丰度/% abundance P值
P valueLC HC 未分类真菌unclassified_fungi 1.61 14.57 <0.01 根囊鞭菌属Orpinomyces 7.32 0.04 <0.01 念珠菌属Candida 1.97 0.05 0.04 瘤胃壶菌属Piromyces 1.75 9.19 <0.01 枝梗鞭菌属Cyllamyces 1.06 0.00 <0.01 厌氧鞭菌属Anaeromyces 0.99 0.00 <0.01 新美鞭菌属Neocallimastix 0.55 9.16 <0.01 未分类新美鞭菌科属unclassified_Neocallimastigaceae 5.08 2.56 0.047 菌生格孢菌属Pleospora 0.00 0.16 <0.01 毕赤酵母属Pichia 0.00 0.19 <0.01 Cutaneotrichosporon 0.00 2.69 <0.01 德巴利酵母属Debaryomyces 0.06 7.79 0.046 曲霉属Aspergillus 0.33 0.12 <0.01 枝孢菌属Cladosporium 0.48 0.29 0.09 瘤胃真菌属Caecomyces 0.30 0.71 0.03 伊萨酵母属Issatchenkia 0.06 8.80 <0.01 酵母菌属Saccharomyces 0.04 1.68 <0.01 克鲁维酵母菌属Kluyveromyces 0.02 2.36 <0.01 3. 讨论
随着高通量测序技术的发展，对奶牛瘤胃微生物区系的研究主要集中在瘤胃细菌方面，而对瘤胃真菌的研究则相对较少。研究发现：瘤胃真菌具有假根，能够产生高活性的纤维素酶降解植物性细胞壁，通过与瘤胃中的细菌和原生动物共同作用，将植物性日粮降解并利用以维持机体代谢活动[10-11]。因此，瘤胃真菌在粗饲料降解方面能发挥重要的作用[12]。研究表明：日粮结构能显著影响瘤胃真菌的数量[13]。FAICHNEY等[14]通过研究精料对绵羊瘤胃中厌氧真菌丰度的影响发现，随着日粮中精料水平增加，绵羊瘤胃真菌总数降低；BAUCHOP等[15]通过研究日粮结构对瘤胃真菌的影响发现，随着日粮精料占比的增加，瘤胃真菌总数有降低的趋势，这与DEHORITY等[16]的研究结果一致；王照华等[17]通过体外方法研究日粮精粗比对瘤胃真菌的影响，结果发现随着日粮精粗比的增加，瘤胃真菌数量下降。本试验中HC组的丰富度指数Ace值和Chao1显著低于LC组，说明随着日粮精粗比的增加，奶牛瘤胃真菌总数降低，本试验研究结果与上述研究一致。本研究表明：LC组Shannon和Simpson指数显著低于HC组，说明随着日粮精粗比的增加，奶牛瘤胃真菌多样性提高，且分布较均匀。张洪涛[18]研究表明：子囊菌门和新丽鞭毛菌门是瘤胃中占比最多的真菌门，是瘤胃中优势菌门，这与LIGGENSTOFFER等[19]研究结果相似。本研究表明：HC组和LC组中瘤胃真菌门中子囊菌门和新美鞭菌门占比较大，与上述研究结果一致。
研究表明：瘤胃中新美鞭菌属具有纤维降解酶活性，能够有效降解日粮中纤维等物质，提高对粗饲料的利用率[20-21]。根囊鞭菌属能够分泌植物细胞壁降解酶，有利于纤维物质的降解转化[22]。韩旭峰[23]通过研究不同精粗比日粮对山羊瘤胃微生物区系的影响发现，随着日粮精粗比的增加，山羊瘤胃中瘤胃壶菌属、根囊鞭菌属和新美鞭菌属丰度降低。本研究表明：HC组瘤胃中新美鞭菌属和瘤胃壶菌属丰度较LC组极显著增加，而根囊菌属丰度较LC组极显著降低。本研究中瘤胃壶菌和新美鞭菌属丰度的变化趋势与韩旭锋[23]的研究结果不一致，其原因可能是日粮结构与饲养管理的不同。有研究证明瘤胃壶菌属产生的木聚糖酶活性在pH为5.0时最高[24]，因此本研究中HC组瘤胃壶菌属丰度的增加在一定程度上提高了瘤胃对半纤维素的降解率；而目前针对不同精粗比日粮下新美鞭菌属丰度变化趋势的研究较少，对此还有待进一步研究。瘤胃中念珠菌属具有降解纤维物质的作用[25]，本研究表明：HC组中念珠菌属丰度显著低于LC组，说明随着日粮中精料水平的增加，念珠菌的生长受到抑制。菌生格孢菌属属于格孢腔菌目中的1种，具有降解纤维类物质的作用[26]，本试验研究表明：HC组的丰度极显著高于LC组，但其丰度在瘤胃中占比较少，所以对纤维素降解影响不大。
不同精粗比饲粮对奶牛瘤胃真菌菌群具有显著影响，随着饲粮中精料水平的增加，奶牛瘤胃中真菌总数降低，但真菌多样性提高。在门水平上，与低精粗比饲粮组相比，高精粗比饲粮组奶牛瘤胃中子囊菌门、担子菌门和新美鞭菌门3种优势真菌门丰度增加；在属水平上，饲粮高精料水平的增加，促进发酵糖的酵母菌丰度增加；提高了部分与纤维降解有关的新美鞭菌属和菌生格孢菌属丰度，但降低了瘤胃中优势真菌属根囊鞭菌属丰度；提高了与半纤维素降解有关的瘤胃壶菌属的丰度。综上所述，不同精粗比饲粮改变了奶牛瘤胃内环境，相对于低精粗比日粮，高精粗比饲粮在一定程度上抑制了纤维降解真菌的生长，降低了奶牛瘤胃中微生物对纤维物质的降解，促进以糖为碳源的酵母菌属的增长，改变瘤胃内菌群结构，影响瘤胃的发酵模式和发酵性能，可能在一定程度上降低日粮的转化效率，从而影响奶牛生产性能。
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表 1 不同精粗比下日粮组成及营养水平(干物质基础)
Table 1 Composition and nutrition content of diet (DM) with different ratios of concentrate to roughage
日粮组成
diet composition含量/% content LC HC 浓缩料concentrate 22.5 23.3 压片tablet 13.84 26.55 甜菜颗粒beet granules 2 4.5 啤酒糟beer slack 1.53 5 苜蓿青贮alfalfa silage 4.12 2 苜蓿alfalfa 10.32 3.02 新青贮new alfalfa 45.06 35 美加力Megalac 0.09 0.09 F100 0.18 0.18 小苏打NaHCO3 0.166 0.166 百霉清MycofixPlus 0.014 0.014 益康XP 0.135 0.135 奥优金Optigen 0.045 0.045 总计total 100 100 
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营养水平
nutrition level组成 composition LC HC 粗蛋白/% crude protein 17.42 17.50 产奶净能/(MJ·kg−1)
milk production net energy5.94 6.48 钙/% Ca 0.76 0.71 磷/% P 0.40 0.44 中性洗涤纤维/%
neutral detergent fiber35.65 31.20 注：LC. 低精粗比40∶60；HC. 高精粗比60∶40；下同。
Note: LC. low ratio of concentrate-to-roughage 40∶60; HC. high ratio of concentrate-to-roughage 60∶40; the same as below.
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表 2 各样品相似性97%时OTU数量
Table 2 The number of OTUs when each sample with the 97% similarity
项目item HC LC 阈值threshold 0.03 0.03 OTU数
OTU number488±60.51 A 764±173.20 B 注：同一项目同行肩标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；下同。
Note: Different capital letters in the same project shoulders indicate that the difference is extremely significant (P<0.01), different lowercase letters indicate significant difference (P<0.05); the same as below.
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表 3 α 多样性指数
Table 3 Diversity index of α
指数index HC LC Ace 1 084.14±182.07 A 1 434.59±358.51 B Chao1 1 088.72±168.71 A 1 460.06±340.57 B Shannon 4.03±0.35 4.00±0.96 Simpson 0.86±0.04 a 0.75±0.14 b
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表 4 真菌门水平丰度
Table 4 The abundance of fungi phylum
门phylum 丰度/% abundance P值
P valueLC HC 子囊菌门Ascomycota 6.31 22.93 <0.01 担子菌门Basidiomycota 0.44 2.78 <0.01 被孢霉亚门Mortierellomycota 0.18 0.000 5 <0.01 毛霉亚门Mucoromycota 0.05 0.1 0.63 新美鞭菌门Neocallimastigomycota 20.97 21.85 0.77 未分类真菌门
unclassified fungi1.61 14.57 0.011
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表 5 真菌属水平丰度
Table 5 The abundance of fungi genus
属水平
genus丰度/% abundance P值
P valueLC HC 未分类真菌unclassified_fungi 1.61 14.57 <0.01 根囊鞭菌属Orpinomyces 7.32 0.04 <0.01 念珠菌属Candida 1.97 0.05 0.04 瘤胃壶菌属Piromyces 1.75 9.19 <0.01 枝梗鞭菌属Cyllamyces 1.06 0.00 <0.01 厌氧鞭菌属Anaeromyces 0.99 0.00 <0.01 新美鞭菌属Neocallimastix 0.55 9.16 <0.01 未分类新美鞭菌科属unclassified_Neocallimastigaceae 5.08 2.56 0.047 菌生格孢菌属Pleospora 0.00 0.16 <0.01 毕赤酵母属Pichia 0.00 0.19 <0.01 Cutaneotrichosporon 0.00 2.69 <0.01 德巴利酵母属Debaryomyces 0.06 7.79 0.046 曲霉属Aspergillus 0.33 0.12 <0.01 枝孢菌属Cladosporium 0.48 0.29 0.09 瘤胃真菌属Caecomyces 0.30 0.71 0.03 伊萨酵母属Issatchenkia 0.06 8.80 <0.01 酵母菌属Saccharomyces 0.04 1.68 <0.01 克鲁维酵母菌属Kluyveromyces 0.02 2.36 <0.01
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[1] TRINCI A P J, DAVIES D R, GULL K, et al. Anaerobic fungi in herbivorous animals[J]. Mycological Research, 1994, 98(2): 129. DOI: 10.1016/S0953-7562(09)80178-0.
[2] SIROHI S K, NASIB S, DAGAR S S, et al. Molecular tools for deciphering the microbial community structure and diversity in rumen ecosystem[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2012, 95(5): 1135. DOI: 10.1007/s00253-012-4262-2.
[3] ORPIN C G. Studies on the defaunation of the ovine rumen using dioctyl sodium sulphosuccinate[J]. Journal of Applied Microbiology, 2008, 43(2): 309. DOI: 10.1111/j.1365-2672.1977.tb00756.x.
[4] BELLEMAIN E, CARLSEN T, BROCHMANN C, et al. ITS as an environmental DNA barcode for fungi: an in silico approach reveals potential PCR biases[J]. BMC Microbiology, 2010, 10: 189. DOI: 10.1186/1471-2180-10-189.
[5] SCHOCHA C L, SEIFERTB K A, HUHNDORF S, et al. Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for fungi[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2012, 109(16): 6241. DOI: 10.1073/pnas.1117018109.
[6] SIROHI S K, CHOUDHURY P K, PUNIYA A K, et al. Ribosomal ITS1 sequence-based diversity analysis of anaerobic rumen fungi in cattle fed on high fiber diet[J]. Annals of Microbiology, 2013, 63(4): 1571. DOI: 10.1007/s13213-013-0620-2.
[7] DAGAR S S, KUMMAR S, MUDGIL P, et al. D1/D2 domain of large-subunit ribosomal DNA for differentiation of Orpinomyces spp.[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2011, 77(18): 6722. DOI: 10.1128/AEM.05441-11.
[8] GRENET E, BRETON A, BARRY P, et al. Rumen anaerobic fungi and plant substrate colonization as affected by diet composition[J]. Animal Feed Science & Technology, 1989, 26(1): 55. DOI: 10.1016/0377-8401(89)90006-0.
[9] 刘开辉, 丁小维, 张波, 等. 高通量测序分析云南腾冲热海热泉真菌多样性[J]. 微生物学报, 2017, 57(9): 1315. DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170026. [10] GRIFFITH G W, OZKOSEL E, THEODOROU M K, et al. Davies diversity of anaerobic fungal populations in cattle revealed by selective enrichment culture using different carbon sources[J]. Fungal Ecology, 2009, 2(2): 87. DOI: 10.1016/j.funeco.2009.01.005.
[11] 孙美洲. 草食动物厌氧真菌与共存甲烷菌的分离鉴定及其代谢产物分析[D]. 南京: 南京农业大学, 2014. [12] EDWARDS J E, FORSTER R J, CALLAGHAN T M, et al. PCR and omics based techniques to study the diversity, ecology and biology of anaerobic fungi: insights, challenges and opportunities[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8: 1657. DOI: 10.3389/fmicb.2017.01657.
[13] 严明. 高精料及其发酵产物对瘤胃真菌生长和发酵活力影响的研究[D]. 南京: 南京农业大学, 2006. [14] FAICHNEY G J, PONCET C, LASSALAS B, et al. Effect of concentrates in a hay diet on the contribution of anaerobic fungi, protozoa and bacteria to nitrogen in rumen and duodenal digesta in sheep[J]. Animal Feed Science and Technology, 1997, 64(2): 193. DOI: 10.1016/s0377-8401(96)01059-0.
[15] BAUCHOP T. The anaerobic fungi in rumen fibre digestion[J]. Agriculture and Environment, 1981, 6(2): 339. DOI: 10.1016/0304-1131(81)90021-7.
[16] DEHORITY B A, TIRABASSO P A. Antibiosis between ruminal bacteria and ruminal fungi[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2000, 66(7): 2921. DOI: 10.1128/AEM.66.7.2921-2927.2000.
[17] 王照华, 侯先志. 持续瘤胃模拟法研究不同日粮精粗比对瘤胃真菌生长和发酵参数的影响[J]. 中国饲料, 2005(9): 17. DOI: 10.3969/j.issn.1004-3314.2005.09.008. [18] 张红涛. 不同玉米青贮水平对荷斯坦后备牛瘤胃液微生物组及其代谢组的影响[D]. 北京: 中国农业大学, 2017. [19] LIGGENSTOFFER A S, YOUSSEF N H, COUGER M B, et al. Phylogenetic diversity and community structure of anaerobic gut fungi (phylum Neocallimastigomycota) in ruminant and non-ruminant herbivores[J]. The ISME Journal, 2010, 4(10): 1225. DOI: 10.1038/ismej.2010.49.
[20] WANG T Y, CHEN H L, LU M Y, et al. Functional characterization of cellulases identified from the cow rumen fungus Neocallimastix patriciarum W5 by transcriptomic and secretomic analyses[J]. Biotechnology for Biofuels, 2011, 4(1): 24. DOI: 10.1186/1754-6834-4-24.
[21] BOOTS B, LILLIS L, CLIPSON N, et al. Responses of anaerobic rumen fungal diversity (phylum Neocallimastigomycota) to changes in bovine diet[J]. Journal of Applied Microbiology, 2013, 114(3): 626. DOI: 10.1111/jam.12067.
[22] ABHAYA R, SMITH O P, YOUSSEF N H, et al. Utilizing anaerobic fungi for two-stage sugar extraction and biofuel production from lignocellulosic biomass[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8(163): 635. DOI: 10.3389/fmicb.2017.00635.
[23] 韩旭峰. 日龄、日粮精粗比对陕北白绒山羊瘤胃微生物区系影响的研究[D]. 杨凌: 西北农林科技大学, 2015. [24] 王砀砀, 赵聪聪, 郭奇奇, 等. 瘤胃真菌分离鉴定及酶学特性[J]. 农业生物技术学报, 2017, 25(10): 1668. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.10.013. [25] ROBERTO I C, MANCILHA I M, SOUZA C A D, et al. Evaluation of rice straw hemicellulose hydrolysate in the production of xylitol by Candida guilliermondii[J]. Biotechnology Letters, 1994, 16(11): 1211. DOI: 10.1007/bf01020853.
[26] 陈晶晶, 王伏伟, 刘曼, 等. 土壤中纤维素降解真菌的筛选及其纤维素酶活性的研究[J]. 安徽农业大学学报, 2014, 41(4): 654. DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20140620.001. -
期刊类型引用(7)
1. 郭法光，孟德坤. 不同精粗比日粮对奶牛产奶性能的影响. 养殖与饲料. 2024(09): 21-24 . 
百度学术
2. 张晓玲，徐田伟，张骞，赵娜，胡林勇，刘宏金，王循刚，徐世晓. 饲粮蛋白水平对牦牛生长性能及瘤胃真菌菌群结构的影响. 饲料研究. 2023(11): 12-15 . 百度学术
3. 郭瑞龙. 不同日粮组成对围产期奶牛泌乳性能和乳品质的影响. 养殖与饲料. 2023(08): 9-12 . 百度学术
4. 马丽琴，温万，田佳，厉龙，王琨，周佳敏，李委奇，路婷婷，徐寒，王玲. 荷斯坦奶牛产犊前后瘤胃发酵参数及微生物区系变化规律的研究. 动物营养学报. 2023(12): 7852-7864 . 百度学术
5. 王循刚，张晓玲，徐田伟，耿远月，胡林勇，赵娜，刘宏金，康生萍，徐世晓. 饲粮蛋白质水平对藏系绵羊瘤胃真菌菌群结构及功能的影响. 草业学报. 2022(02): 182-191 . 百度学术
6. 马丽琴，王玲，温万，田佳，周佳敏，王凤莲，马旭林，陈昊. 蛋氨酸羟基类似物异丙酯对围产期奶牛瘤胃发酵及微生物区系的影响. 动物营养学报. 2022(07): 4425-4437 . 百度学术
7. 韦玥瑞，张晓东，李科南，娜梅拉，杨硕，梁天，娜仁花. 日粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃真菌多样性的影响. 饲料研究. 2021(23): 6-11 . 百度学术
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