桑葚菌核病(mulberry fruit sclerotiniosis)是一种由真菌危害桑果引起的一类桑树病害^[1-2]。桑葚菌核病有3种，分别为桑葚肥大型菌核病(mulberry sorosus hypertrophic sclerote disease)、桑葚小粒型菌核病(mulberry sorosus parvulling sclerote disease)、桑葚缩小型菌核病(mulberry sorosus diminuting sclerote disease)^[1]。该病在全国果桑种植区均有不同程度发生，在多湿的南方地区尤为严重，发病率高达30%～90%^[3-5]。桑葚菌核病病原在桑树花期侵入雌花，病果初期花被和子房显著膨大，花被尖紫红或青红，近柱头呈现“白嘴”，随着菌丝生长，菌核形成，病果呈灰白色或白色，病果肿大、有异味，失去商品和食用价值。

桑葚菌核病主要以化学药剂防治为主^[5-8]，利用生物制剂防治番茄灰霉病、棉花黄萎病、大白菜霜霉病等植物病害报道较多并表现出较好的防治效果^[9-11]，但通过生物防治桑葚菌核病目前还鲜有报道。由于化学农药的长期使用，病原菌抗性逐渐增强^[12-13]，药效降低，并使得桑葚具有农药残留^[14]，环境污染严重，利用生物防治桑葚菌核病日益受到人们的重视。本试验利用5种生物制剂对桑葚菌核病开展田间防治试验，旨在为桑葚菌核病生物防治提供依据，同时为桑葚菌核病防治开辟新的途径。

1.   材料与方法

1.1   试验材料

试验设在重庆三峡农业科学院甘宁基地果桑示范园内，果桑品种为‘大10’，十五年生，株行距100 cm×167 cm。地势平坦，沙壤土，pH值为8.2，有机质含量2.90 g/kg，碱解氮98.6 mg/kg，有效磷42.0 mg/kg，有效钾110.2 mg/kg。

供试生物制剂：2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌(WP)，山东泰诺药业有限公司提供；4%嘧啶核苷类抗生素(水剂)，陕西麦可罗生物科技有限公司，市购； 3%中生菌素(WP)，深圳瑞德丰，市购；3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌(WP)，美国邦沃股份有限公司，网购；47%春雷·王铜(WP)，江门市植保有限公司，市购。

1.2   试验设计

桑葚菌核病生物防治采用田间试验，选用5种生物制剂，每种生物制剂设3个稀释梯度，清水作对照，共16个处理。每个处理小区面积25.0 m²共15株桑树，采用随机排列，小区间设保护行，每个试验设3个重复。

1.3   试验时间

药剂加水稀释不同倍数，采用3WBS-16型背负式手动喷雾器在上午露水干后对树内、树冠均匀喷雾，以滴水为度。分别于2016年3月10日桑树的初花期(5%开花)、3月17日盛花期(50%开花)和3月24日谢花期(85%开花)进行3次施药。试验期间未使用任何防治其他病虫害的药剂。

1.4   调查方法

药剂防治在施药后第2天开始调查药害(3月11日—4月1日)，每个处理定点调查3株树，每3 d调查1次。桑果开始出现病果时采摘病果，每2~3 d采摘1次病果、健康果，直至果期结束。记录每处理健康桑果粒数、病果粒数，计算总果粒数、病果率和校正防效，计算公式为

病果率=全株病果粒数/全株桑果粒数×100%；

校正防效=(CK−PT)/CK×100%。

式中，PT为处理区病果率；CK为对照区病果率。对试验结果采用Excel、SPSS 16.0 One-Way ANOVA进行统计分析。

2.   结果与分析

2.1   不同生物制剂对桑葚菌核病的防治效果

表1表明：5种生物制剂对桑葚菌核病均有一定防效，各种生物制剂防治桑葚菌核病的病果率及防效存在差异。其中，2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌(WP)对桑葚菌核病防效最好，防效达到70%以上，病果率控制在6%以下；其次是3%中生菌素(WP)和47%春雷·王铜(WP)，防效达到58%以上，病果率控制在9%以下；3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌(WP)和4%嘧啶核苷类抗生素(水剂)对桑葚菌核病防效最差，防效低于50%，病果率达到11%以上。2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌(WP)与其他4种生物制剂间防效差异显著(P<0.05)； 3%中生菌素(WP)与47%春雷·王铜(WP)、3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌(WP)与4%嘧啶核苷类抗生素(水剂)两两之间有差异但差异不显著(P>0.05)，前两种生物制剂与后两种防效差异显著(P<0.05)。

表  1  不同生物制剂对桑葚菌核病防效(mean±SD)

Table  1.  The control effect of different biological agents against mulberry fruit sclerotiniosis

药品fungicides	稀释倍数dilution times	病果率/% incidence	校正防效/% corrected control effect
泰诺木霉菌Trichoderma viride	300	3.45±1.1 a	83.75±6.1 a
嘧啶核苷类抗生素pyrimidine nucleoside antibiotics	300	14.63±0.6 e	37.03±8.8 d
中生菌素mesoin	300	7.47±1.3 bc	64.71±10.0 b
哈茨木霉菌 Trichodema harzianum	300	11.07±2.0 d	48.52±8.8 cd
春雷·王铜kasugamycin·copper oxychloride	300	8.86±0.6 cd	58.55±6.4 bc
清水water	CK	21.57±2.1 f	0.00 e
注：表中差异分析方法为Duncan，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；下同。 Note: The difference analysis method is Duncan’s and different lowercases mean significant difference (P<0.05); the same as below.

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2.2   同一生物制剂不同处理对桑葚菌核病的防治效果

由表2可见：同一生物制剂不同处理对桑葚菌核病的防效存在差异，同一生物制剂随着药液浓度增加，防效呈上升趋势。2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌(300，500，800倍) 3个处理病果率在3.45%～6.52%，防效83.75%～69.77%；4%嘧啶核苷类抗生素(水剂)在(300，500，800倍) 3个处理间病果率13.61%～14.63%，防效32.81%～37.03%；3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌(300，500，800倍)病果率11.07%～13.93%，防效48.52%～35.03%，这3种制剂的不同处理病果率及防效差异不显著；3%中生菌素200倍处理病果率7.47%，防效64.71%，但在400～600倍下病果率14.13%～14.46%，防效33.94%～31.79%，病果率及防效存在显著差异，而400～600倍下差异不显著；47%春雷·王铜在(300，500倍) 2个处理下，病果率8.86%～10.22%，防效58.55%～52.71%，病果率与防效差异不显著，但在800倍处理下，病果率达到15.22%，防效29.92%与前两个处理存在显著差异。

表  2  同一生物制剂不同处理对桑葚菌核病防治效果

Table  2.  The control effect of different dosages of biological agents against mulberry fruit sclerotiniosis

药品 fungicides	稀释倍数 dilution times	病果率/% incidence	校正防效/% corrected control effect
泰诺木霉菌 Trichoderma viride	300	3.45±1.1 a	83.75±6.1 a
	500	5.40±3.6 ab	73.05±19.0 ab
	800	6.52±1.1 abcd	69.77±4.0 ab
嘧啶核苷类抗生素 pyrimidine nucleoside antibiotics	300	14.63±0.6 fg	37.03±8.8 cd
	500	14.39±2.3 fg	32.81±17.0 cd
	800	13.61±2.6 fg	33.08±8.7 cd
中生菌素 mesoin	200	7.47±1.3 abcd	64.71±10.0 ab
	400	14.13±4.5 fg	33.94±21.5 cd
	600	14.46±3.8 fg	31.79±23.4 cd
哈茨木霉菌 Trichodema harzianum	300	11.07±2.0 defg	48.52±8.8 bcd
	500	13.93±0.9 fg	35.03±7.4 cd
	800	13.86±0.5 fg	35.46±4.4 cd
春雷·王铜 kasugamycin·copper oxychloride	300	8.86±0.6 bcde	58.55±6.4 abc
	500	10.22±1.5 cdef	52.71±3.3 bcd
	800	15.22±3.4 g	29.92±9.7 d
清水 water	CK	21.57±2.1 h	0.00 e

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2.3   生物制剂对桑葚和桑叶药害症状调查

从3月11日—4月1日分别对各处理区的桑叶和桑葚进行定期观察。喷施5种生物制剂后，4%嘧啶核苷类抗生素(水剂)、3%中生菌素(WP)、3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌(WP) 3种生物制剂对桑葚的果形、生长、质量无明显影响，桑叶的叶形和叶色均无明显异常；47%春雷·王铜(WP)对桑叶有明显药害，桑果缩小虽能成熟但影响桑树生长； 2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌(WP)对桑果无明显影响，刚开叶的黄色嫩叶表现出轻微药害，出现褐色小点，稀释倍数越小，症状越明显，但不影响桑树正常生长，桑叶叶色转绿后不表现药害，停止用药后不再产生药害，对全年桑叶产量也没有较大影响。

3.   讨论

果桑生产是蚕桑产业近年实施多元化发展较为成功的一个分支，但随着果桑快速发展，果桑第一大病害——桑葚菌核病危害也越来越严重，在一些果桑种植区桑葚菌核病的发病率达90%。目前生产上主要采用甲基硫菌灵、多菌灵等化学药剂防治桑葚菌核病，在油菜作物上，发现油菜菌核病原菌对多菌灵产生了抗药性^[12-13]，长期使用化学农药不但造成桑园环境污染，而且易使桑葚农药残留超标^[14]，直接影响桑葚品质和食用安全性。

随着人们对保护环境重视程度的增加以及对农产品质量要求的提升，如今针对植物病害化学农药防治已不是理想的防治方法。近年来，国内外有关生物防治植物病害的文献资料急剧增加，生物防治的生产实践也在扩大。目前，生防技术的生产应用还处于温室和小面积田间试验阶段，但大面积生物防治也在一些植物病害的实践中取得了可喜成果^[9-11]。因此，生物防治将是今后控制桑葚菌核病发生的新途径和重要举措。

本次试验对5种生物制剂采用不同稀释倍数防治桑葚菌核病，同一生物制剂不同处理对桑葚菌核病的防效存在差异，稀释倍数越小，防效越好。3%中生菌素在300倍处理与500、800倍处理差异显著，因此对这种生物制剂的防治桑葚菌核病建议做进一步稀释试验。2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌3个处理防效83.75%～69.77%、4%嘧啶核苷类抗生素3个处理防效32.81%～37.03%、3×10⁸ CFU/g哈茨木霉菌3上处理防效48.52%～35.03%，这3种制剂不同处理防效差异不显著，但后两种生物制剂防效不理想，2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌建议在生产中可按试验中低浓度应用。47%春雷·王铜对桑叶和桑果有明显的药害，建议不使用该制剂防治桑葚菌核病。

木霉菌(Trichoderma spp.)属半知菌纲，是自然界中普遍存在的微生物，是一种广泛的植物病害防治生物菌，木霉菌具有多种作用机制及防病谱广、低毒、低残留、适应性强、是对环境安全的一种植物内生性生防菌。从20世纪70年代以来，国内外对木霉菌的生物防治机制展开了广泛性研究，发现木霉菌不仅具有显著的生防作用，而且还可以调节植物的生长和提高植物对病原菌的抵抗力^[15]。2×10⁸ CFU/g泰诺木霉菌可湿性粉剂防效69.77%～83.75%，与目前生产中应用的化学药剂腐霉利防效相当^[5]，木霉菌仅对初开发黄的嫩叶有药害，但不影响桑树正常生长，对桑叶产量没有明显影响，根据有关报道木霉菌对家蚕是安全的^[16]。因此泰诺木霉菌有一定的应用价值，可作为桑葚菌核病的防治药剂，生产中建议使用量为500～800倍液。利用生物防治桑葚菌核病是桑葚菌核病综合防治的一项新举措，本次试验主要从市场上常见的5种生物制剂进行了田间防治试验，还需进一步开展生物制剂防治桑葚菌核病的药剂筛选试验。